Funktionsanalyse der Translokase-Komponente SecA

Die Translokationskomponente SecA von E.coli bindet an translozierende Proteine und ¿fädelt" diese unter ATP-Verbrauch in die Membran ein. Während dieses Vorgangs inserieren bestimmte Domänen des SecA Proteins selbst transient in die Membran und SecA exponiert somit diese Proteinregionen an der periplasmatischen Seite der Membran, vermutlich in einem zyklischen Rhythmus. Es wird angenommen, dass dabei schrittweise jeweils auch ein Teil des translozierten Membranproteins mitgenommen wird. Der SecA-Zyklus soll mit einem Minimalsubstrat, welches ebenso wie das SecA Protein gereinigt vorliegt, untersucht werden. Mit Hilfe einer auf Lasertechnik (resonant mirror technique) basierenden Affinitäts-Sensor-Technik können dann die Interaktionen zwischen dem Membranprotein (Substrat), der SecA Komponente und den übrigen Translokase-Bestandteilen SecYEG in Echtzeit verfolgt werden. Mit cross-linker Experimenten sollen zusätzlich die Bereiche des Minimalsubstrats genauer bestimmt werden, die von SecA erkannt und gebunden werden. Literatur: Hendrick, J.P. & W. Wickner (1991) J. Biol. Chem. 266, 24596-24600; Economou, A. & W. Wickner (1994) Cell 78, 835-843; Kuhn, A. (1988) Eur. J. Biochem. 177, 267-271.